trypsine edta celkweekprotocol

Procedure

1. Verwijder medium uit kweekvat door aspiratie en was de monolaag met een zoutoplossing vrij van Ca²⁺ en Mg²⁺ om alle sporen van serum te verwijderen. ...
2. Doseer voldoende trypsine of trypsine / EDTA-oplossing in kweekvat (en) om de monolaag van cellen volledig te bedekken en plaats ze in een incubator van 37 ° C gedurende ~ 2 minuten.

1. Hoe bereid je een trypsine EDTA-oplossing voor celkweek?
2. Waarom trypsine EDTA wordt gebruikt in celkweek?
3. Hoe wordt het subcultureren van aanhangende cellen gedaan met alleen trypsine EDTA en EDTA??
4. Hoe ontdooi je trypsine EDTA?
5. Kan trypsine cellen doden?
6. Wat kunnen we aan de cultuur toevoegen om trypsine te remmen?
7. Kan EDTA cellen doden?
8. Waarom remt serum trypsine??
9. Is EDTA giftig voor cellen?
10. Waarom gebruiken we trypsine?
11. Waarom was je cellen met PBS??
12. Waarom was je de cellen met PBS voordat je trypsine toevoegt??

Hoe bereid je een trypsine EDTA-oplossing voor celkweek?

Voeg 12 tot 15 mL verse celkweekmedia toe aan een nieuwe kolf en breng deze media in evenwicht tot de juiste pH en temperatuur. Verzamel de celsuspensie, tel en / of verdeel deze, en doe de cellen in de nieuw bereide kolf. Raadpleeg het productblad van de cellijn voor de aanbevolen verhoudingen voor subcultivatie.

Waarom trypsine EDTA wordt gebruikt in celkweek?

EDTA fungeert als een metaalchelator, die wordt toegevoegd aan trypsine-oplossingen om de activiteit te versterken. EDTA wordt toegevoegd om het calcium en magnesium van het celoppervlak te verwijderen, waardoor trypsine specifieke peptidebindingen kan hydrolyseren. De belangrijkste reden om de EDTA samen met trypsine te gebruiken, is om cel-celadhesie te verwijderen.

Hoe wordt het subculturen van aanhankelijke cellen gedaan met alleen trypsine EDTA en EDTA??

Pipetteer trypsine / EDTA op de gewassen celmonolaag met ongeveer 1 ml per 25 cm2 oppervlak. Draai de kolf om de monolaag met trypsine te bedekken. Schenk de overtollige trypsine af. Plaats de kolf terug in de incubator en laat 2-10 minuten staan.

Hoe ontdooi je trypsine EDTA?

Haal de trypsine / EDTA-oplossing uit de opslag en bewaar deze een nacht bij 2 ° C tot 8 ° C. 2. Breng de fles over in een waterbad van 37 ° C en schud de fles voorzichtig om eventuele opgeloste stoffen te mengen. Bewaar de trypsine / EDTA-oplossing niet langer dan nodig bij 37 ° C.

Kan trypsine cellen doden?

Het incuberen van cellen met een te hoge trypsineconcentratie gedurende een te lange periode zal de celmembranen beschadigen en de cellen doden..

Wat kunnen we aan de cultuur toevoegen om trypsine te remmen?

Trypsine wordt geremd door serum dat de tweewaardige kationen levert, zoals calcium en magnesium, dat een rol speelt in zowel het intra- als het intercellulaire signaleringsproces, dwz de vorming van CAM's, dus serum wordt gewoonlijk aan de container toegevoegd zodra de cellen zijn losgemaakt - dit kan worden bevestigd door observatie onder een microscoop.

Kan EDTA cellen doden?

een. Gebruik 5 mM EDTA of hoger OPMERKING: te veel EDTA kan uw cellen doden b. Accutase en Accumax zijn celdissociatieproducten die worden verkocht door Innovative Technologies en die kunnen helpen bij het handhaven van eencellige suspensies.

Waarom remt serum trypsine??

Hallo, Trypsine is een endopeptidase, dat eiwitten verteert. Bij het trypsinisatieproces worden extracellulaire eiwitten verteerd, wat leidt tot het loslaten van de cellen van de bodem van het kweekvat. ... Serum bevat veel proteaseremmers, die trypsine stoppen, meestal alfa-1-antitrypsine. Ik hoop dat dit helpt!

Is EDTA giftig voor cellen?

Er werd geen toxiciteit waargenomen wanneer cellen werden blootgesteld aan 100 microM Zn- of Fe-EDTA, maar dezelfde concentratie Cu-EDTA was even giftig als Na-EDTA. Continue blootstelling van de celculturen aan 5 microM Na- of Zn-EDTA gedurende maximaal 7 weken gaf geen aanwijzingen voor toxiciteit.

Waarom gebruiken we trypsine?

Trypsine is een enzym dat ons helpt bij het verteren van eiwitten. In de dunne darm breekt trypsine eiwitten af, waardoor het verteringsproces dat in de maag is begonnen, wordt voortgezet. Het kan ook een proteolytisch enzym of proteïnase worden genoemd. Trypsine wordt door de alvleesklier geproduceerd in een inactieve vorm die trypsinogeen wordt genoemd.

Waarom was je cellen met PBS??

In celkweek tijdens spilitting is PBS-wassen nodig om het serum van media te verwijderen, zodat trypsine de cellen van de plaat kan losmaken, anders kan serum de trypsine inactief maken.

Waarom was je de cellen met PBS voordat je trypsine toevoegt??

Voordat u het aan de cellen toevoegt, moet u de celkweekmedia wegspoelen, aangezien trypsine ook eiwitten afbreekt die in de media aanwezig zijn, zoals FCS, waardoor de activiteit ervan vermindert voordat het de cellen bereikt.