bestellen van reverse primers

1. Hoe bestel je reverse primers?
2. Hoe kies je voorwaartse en achterwaartse primers?
3. Hoe lees je een reverse primer?
4. Hoe kies ik een primer voor sequencing?
5. Wat is de reverse primer?
6. Heeft u voorwaartse en achterwaartse primers nodig voor het bepalen van de volgorde?
7. Waarom heb je voorwaartse en achterwaartse primers nodig bij PCR?
8. Hoe ontwerp je handmatig een primer??
9. Waarom hebben verschillende primers verschillende gloeitemperaturen nodig??
10. Wat is omgekeerd complement?
11. Moeten PCR-primers complementair aan elkaar zijn?
12. Moeten primers dezelfde lengte hebben?

Hoe bestel je reverse primers?

Voor een reverse primer: schrijf de complementsequentie van het 3'-uiteinde van de sense-sjabloon, draai deze om, zodat het kan worden gelezen als 5'-3 'en voeg een extra sequentie toe aan het 5'-uiteinde van deze primer. Voor het hierboven gegeven voorbeeld zal de 5'-3'-modus van de reverse primer dus zijn: 5'-NNNNNNNNNNN-CTCTAGAATCCTCAA-3 '. Het is gemakkelijk, is het niet??

Hoe kies je voorwaartse en achterwaartse primers?

Voorwaartse en achterwaartse primers moeten ongeveer 500 bp van elkaar verwijderd zijn. Het 3'-uiteinde van de primer moet een G of een C zijn. De genomische sequentie die van de computer komt, is slechts één streng; de complementaire streng is niet getoond. Voor de voorwaartse primer kunt u de reeks rechtstreeks gebruiken.

Hoe lees je een reverse primer?

Omdat primers door mensen worden gelezen en gemaakt, moet onze reverse primer van het begin tot het einde worden geschreven. Dit wordt het "omgekeerde complement" van de bovenste streng genoemd. De 4 basen die binden aan de 3 'van de bovenste streng zijn TCGC. Maar onthoud dat de primer begint aan het 3'-uiteinde, dus het moet worden gelezen als CGCT.

Hoe kies ik een primer voor sequencing?

Hier zijn een paar dingen waarmee u rekening moet houden bij het ontwerpen van uw eigen primers.

1. De lengte van de primer moet tussen de 18 en 22 basen liggen.
2. De primer moet een GC-gehalte hebben van 50% tot 55%.
3. Primers moeten een GC-lock hebben aan het 3'-uiteinde.
4. De smelttemperatuur van elke goede primer moet tussen 50 ° C en 55 ° C liggen.

Wat is de omgekeerde primer?

Primers zijn korte sequenties van enkelstrengs DNA die beide uiteinden van de doelsequentie markeren. ... de voorwaartse primer hecht zich aan het startcodon van het template-DNA (de antisense-streng), terwijl de reverse primer zich hecht aan het stopcodon van de complementaire DNA-streng (de sense-streng).

Heeft u voorwaartse en achterwaartse primers nodig voor het bepalen van de volgorde?

Gewoonlijk kan de voorwaartse of achterwaartse primer die voor de PCR-reactie wordt gebruikt, worden gebruikt in de sequentiereactie. ... We raden twee sequentiereacties aan voor elk fragment van belang om dubbelstrengs sequentiebepaling van het fragment te verzekeren. Gegevensanalyse is niet helemaal nauwkeurig voor de eerste en laatste 25 bases van de reeks.

Waarom heb je voorwaartse en achterwaartse primers nodig bij PCR?

In elke PCR-reactie worden twee primers, voorwaartse primer en omgekeerde primer, gebruikt, die zijn ontworpen om het doelgebied voor amplificatie te flankeren. ... de voorwaartse primer bindt aan het sjabloon-DNA, terwijl de omgekeerde primer zich bindt aan de andere complementaire streng, die beide worden geamplificeerd in PCR-reactie.

Hoe ontwerp je handmatig een primer??

Rekening houdend met de bovenstaande informatie, zouden primers over het algemeen de volgende eigenschappen moeten hebben:

1. Lengte van 18-24 basen.
2. 40-60% G / C-inhoud.
3. Begin en eindig met 1-2 G / C-paren.
4. Smelttemperatuur (Tm) van 50-60 ° C.
5. Primerparen moeten een Tm hebben binnen 5 ° C van elkaar.
6. Primerparen mogen geen complementaire regio's hebben.

Waarom hebben verschillende primers verschillende gloeitemperaturen nodig??

Bij lagere temperaturen zal een gedeeltelijke overeenkomst tussen de primer en de sjabloon stabiel genoeg zijn en krijgt u versterking van meer plaatsen. Hoe hoger de temperatuur is, de primer heeft een langere compatibele sequentie nodig om zich aan te binden en als resultaat zal uw specificiteit hoger zijn.

Wat is omgekeerd complement?

Omgekeerde aanvulling. Omgekeerd complement zet een DNA-sequentie om in zijn omgekeerde, complement- of omgekeerde complement-tegenhanger. Misschien wilt u werken met het omgekeerde complement van een reeks als deze een ORF op de omgekeerde streng bevat. Plak de onbewerkte of FASTA-reeks in het onderstaande tekstgebied.

Moeten PCR-primers complementair aan elkaar zijn?

NEE! De twee primers die bij PCR worden gebruikt, zouden niet complementair moeten zijn, anders zullen ze aan elkaar hechten en een "primerdimeer" vormen. Als een primerdimeer aanwezig is in de PCR-reactie, kan DNA-polymerase het primerdimeer amplificeren, dat PCR-reagentia verbruikt en mogelijk de amplificatie van doel-DNA remt.

Moeten primers dezelfde lengte hebben?

1. Primerlengte: Algemeen wordt aangenomen dat de optimale lengte van PCR-primers 18-22 bp is. Deze lengte is lang genoeg voor voldoende specificiteit en kort genoeg om primers gemakkelijk aan het sjabloon te laten binden bij de annealingstemperatuur.